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| 單步驟反轉錄聚合酶鏈鎖反應試劑 |
產品編碼 ： Bio-ORT-50
產品規格 ： 50R
廠 牌 ： Biokit
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| 詳細資料 |
一、 產品基本資料
產品名稱：一步法反轉錄聚合酶鏈鎖反應試劑盒 (One step RT-PCR kit)
包裝規格：50 次反應 (50 Reactions) / 盒
產品外觀：低溫凍存之澄清無色溶液
組分配置：內含特異性優化之反轉錄酶與高保真熱啟動 DNA 聚合酶預混酶液、1X 反應緩衝液系統（含核苷酸與核心游離鎂離子）。
儲存條件：-20°C 恆溫冷凍保存，避免存於無霜冰箱的自動除霜區。
運輸條件：全程使用乾冰或超低溫冰寶運輸。
產品用途：本產品僅限科學研究與實驗室研發使用，不得用於臨床診斷、人體或動物之醫療與食品。
二、 化學與物理性質
化學組成：由高熱穩定性、無核糖核酸酶 H 活性的重組反轉錄酶，與具備抗體或化學修飾的熱啟動 DNA 聚合酶精準調配而成的雙酶單管預混系統。
催化機制：在單一反應管中，反轉錄酶首先以總核糖核酸或信使核糖核酸為模板，合成第一條互補去氧核糖核酸鏈；隨後經高溫變性使反轉錄酶滅活並釋放熱啟動聚合酶，直接進入特異性 DNA 擴增循環。
酶活性殘留：經嚴格品質控管，無可偵測之核酸內切酶、核酸外切酶或外源核糖核酸酶活性殘留。
三、 核心實驗應用情境
病毒核酸快速定性檢測：專為核糖核酸病毒的超靈敏度、高特異性檢測設計，在單一管中完成全部反應，大幅降低多管操作引發的交叉污染風險。
低豐度基因表達定量篩選：適用於從稀有細胞、臨床科研組織樣本提取之總 RNA 中，快速鑑定特定低表達量靶標基因的轉錄水平。
高通量基因組結構分析：利用其雙酶協同高效催化能力，適用於多樣本、大批量基因表达谱的快速縱向對比。
四、 標準操作步驟
步驟一：反應體系配製
於冰浴上配製反應。在總體積 20 到 50 µL 的常規反應體系中，依序加入計算好劑量的無核糖核酸酶水、反應緩衝液、前向與反向特異性引物、1 到 2 µL 預混雙酶液，最後加入 10 ng 至 1 µg 的模板 RNA。
步驟二：混勻與離心
使用微量移液管輕柔吹吸混勻，或輕彈管壁後進行瞬間離心使混合液完全集聚管底。本產品日常操作請避免劇烈震盪，以維持雙酶之催化活性。
步驟三：擴增程序設定
將反應管置於熱循環儀中，依據以下標準流程啟動反應：
50°C 溫育 15 到 30 分鐘（反轉錄反應）
95°C 加熱 2 到 5 分鐘（反轉錄酶滅活與熱啟動 DNA 聚合酶激活）
進行 35 到 40 個循環：95°C 變性 15 秒，55°C 至 60°C 退火 30 秒，72°C 延伸 1 分鐘
最後 72°C 延伸 5 分鐘，隨後降溫至 4°C，產物可直接進行瓊脂糖凝膠電泳觀測。
五、 核心操作注意事項
外源核糖核酸酶嚴格防範：核糖核酸對環境中的核糖核酸酶極度敏感。操作全程務必配戴無粉手套、使用經認證無酶的帶濾芯移液管尖，並於專用的超淨工作台內進行，防止環境污染導致模板降解。
引物特異性設計原則：本產品屬於一步法終點式 PCR 系統，無法中途更換引物。設計引物時務必確保退火溫度一致（推薦 55°C 到 60°C），並避免形成嚴重的引物二聚體，以防大幅降低目標片段的擴增效能。
避免頻繁凍融：頻繁的溫度循環會引發預混酶液中的精密緩衝組分與抗體失活。首次開封後，強烈建議依據實驗室日常消耗量，將其微量分裝成小體積存於 -20°C 凍存，以最大程度延長產品壽命。 |
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來電洽詢
 產品相關檔案 |
| 檔案名稱 |
檔案大小 |
上傳時間 |
下載 |
| 單步驟 RT-PCR-Bio-ORT-50.pdf |
41KB |
2013/10/30 上午 09:34:24 |
下載 |
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 購物說明： |
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