一、 產品特點與背景（Background & Specifications）
RIPA 緩衝液是一種含有較強去污劑配方的細胞裂解液，常用於從細胞或組織中萃取蛋白質，並進行後續的免疫沉澱（Immunoprecipitation, IP）或西方墨點法（Western Blotting, WB）等分析。

• 強效裂解與增溶能力： 能有效溶解細胞膜蛋白並釋放細胞質內的蛋白質成分。
• 微變性（Mildly Denaturing）特性： 由於含有離子型去污劑（如 SDS），它具備輕微變性效果，有助於將較難溶解的蛋白質或複合體打開。
• 方便使用： 已預先配製好的 1X 工作液，節省手動調配時間。

1. Tris： 緩衝體系，維持穩定的生理 pH 環境。
2. NaCl： 提供離子強度與滲透壓，維持蛋白質膠體狀態。
3. SDS： 強效陰離子去污劑，幫助變性並溶解蛋白質。
4. 1% NP-40： 非離子去污劑，溫和增溶膜脂質。
5. Sodium Deoxycholate： 陰離子去污劑，輔助破壞細胞膜與核膜結構。

• 新鮮添加蛋白酶/磷酸酶抑制劑： 預配好的 1X RIPA 基礎液通常不含酵素抑制劑。為防止樣品中的蛋白質在裂解過程中被降解或去磷酸化，使用前請務必新鮮加入 Protease / Phosphatase Inhibitor Cocktail。
• 全程低溫操作： 裂解細胞與組織時，請保持在冰上（4°C）進行，以確保蛋白質結構與樣品穩定。
• 應用評估： 若 downstream 實驗需要保持蛋白質天然活性能量或極為脆弱的蛋白質-蛋白質相互作用（Co-IP），建議評估是否改用無 SDS 的非變性裂解液（Non-Denaturing Lysis Buffer）。

1. 樣品準備與洗滌：
   • 移除培養皿中的舊培養基。
   • 用冷（4°C）1X PBS 輕柔洗滌細胞 2 次，完全吸乾洗滌液。
2. 加入 RIPA 裂解液：
   • 臨用前在 RIPA Buffer 中加入 Protease / Phosphatase Inhibitors。
   • 依培養皿大小加入適量預冷的 RIPA 裂解液：
     • 6-well plate：約 100–200 µL / well
     • 10 cm dish：約 300–500 µL / dish
3. 刮取細胞與冰上裂解：
   • 將培養皿放在冰上，用冰預冷的細胞刮棒（Cell Scraper）將細胞輕柔刮下。
   • 將細胞懸浮液轉移至預冷的 1.5 mL EP 管中。
   • 在冰上靜置裂解 15–30 分鐘，期間每 5 分鐘用微量 Vortex 輕微混勻或翻轉管子 2–3 次。
4. 離心與收集上清液：
   • 設定 4°C、14,000–16,000 × g（或最高速）離心 15 分鐘。
   • 離心後，仔細吸取上清液（即含有總蛋白萃取物）轉移至全新的冷 EP 管中，注意切勿吸到底部黏稠的沉澱物（包含核酸、未裂解碎片及細胞骨架）。

1. 收集與洗滌細胞：
   • 將細胞懸浮液收集至 EP 管中，4°C、1,000 rpm 離心 5 分鐘沉澱細胞，棄去培養基。
   • 加入預冷 1X PBS 重懸洗滌細胞 2 次，每次離心後完全吸去上清液。
2. 裂解與離心：
   • 依細胞量加入適量含有抑制劑的冷 RIPA 緩衝液（每 10⁶ 個細胞約加入 100 µL RIPA）。
   • 用槍頭輕輕吹吸重懸，於冰上靜置裂解 20–30 分鐘（期間定期混勻）。
   • 設定 4°C、14,000–16,000 × g 離心 15 分鐘，收集上清液。

1. 組織處理：
   • 取出組織樣品（若是冷凍組織請迅速在冰上操作），用 PBS 洗去血液後切成小塊（約 1–2 mm³）。
2. 加入 RIPA 與研磨：
   • 依組織重量按比例加入包含抑制劑的冷 RIPA（通常為 每 10 mg 組織加入 100–200 µL RIPA）。
   • 使用組織勻漿器（Homogenizer）、電動研磨棒或超音波破碎儀進行充分研磨打碎。
3. 裂解與離心：
   • 將研磨後的樣品於冰上靜置裂解 30 分鐘。
   • 設定 4°C、12,000–16,000 × g 離心 20 分鐘。
   • 吸取中間清亮的上清液轉移至新管中（若上層有油脂浮層，請避開上層油脂與底部沉澱）。

• 全程低溫： 從洗滌到離心，所有操作與離心機皆必須維持在 4°C 或冰上，防止內源性蛋白酶降解蛋白。
• 新鮮添加抑制劑： Protease / Phosphatase Inhibitor Cocktail 必須在臨用前新鮮加入 RIPA 中，不能提前大量配製儲存。
• 樣品定量與保存： 收集到的上清液建議使用 BCA Assay 進行蛋白質定量。若非當天使用，請加入 Sample Buffer 煮沸變性，或直接將萃取液分裝凍存於 -80°C（避免反覆凍融）。