📦 SOB 肉湯培養基（SOB Broth / Super Optimal Broth）規格說明書

🔬 一、 標準配方比例（每公升 / 1000 mL）
SOB 肉湯是由 Hanahan 於 1983 年研發的高密度液態培養基。每公升的標準秤重通常為 26.0–28.0 公克（依各廠牌二價金屬鹽配方略有不同）：

• 胰蛋白腖（Tryptone）： 20.0 g（倍量於常規 LB 培養基，提供極高濃度的短鏈胜肽與有機氮源）
• 酵母萃取物（Yeast Extract）： 5.0 g（提供維生素 B 群與微量元素）
• 氯化鈉（NaCl）： 0.5 g（極低鹽設計，僅為標準 LB Miller 配方的 5%）
• 氯化鉀（KCl）： 0.186 g（約 2.5 mM，與低鈉搭配，調整細胞膜電位平衡）
• 最終 pH 值（25°C）： 7.0 ± 0.2

• 高效率化學轉型與電穿孔： 傳統 LB 培養基的高鹽（NaCl）環境會增加溶液導電率，易在電擊時產生電弧（Arcing）燒死細菌；且高鈉離子會干擾外源質體 DNA 穿透細胞膜。SOB 透過「極低鈉、低導電率」設計，能顯著提升大腸桿菌吞噬外源質體的成功率。
• 促使高密度菌體健壯生長： 提供比常規 LB 高出一倍的 Tryptone 營養，能讓大腸桿菌在對數生長期（Log Phase）分裂得更為健壯，細胞膜結構維持最佳狀態。

• 2 M 鎂離子儲備液（Magnesium Stock Solution）配製：
  • 通常將 1 M 硫酸鎂 (MgSO₄·7H₂O) 與 1 M 氯化鋇或氯化鎂 (MgCl₂·6H₂O) 依 1:1 體積混合後過濾除菌。
• 工作液添加量：
  • 在每 1000 mL 滅菌冷卻後的 SOB 肉湯中，必須無菌加入 10 mL 的 2 M 鎂離子儲備液（使其最終濃度達到 20 mM）。
  • 生化功能： 高濃度的鎂離子能有效穩定大腸桿菌受外力衝擊的細胞外膜（Outer Membrane），對胜任細胞的存活至關重要。

1. 懸浮溶解： 秤取預混之 SOB 基礎粉末（或依 Tryptone 20g, Yeast 5g, NaCl 0.5g, KCl 0.186g 比例自行調配），完全懸浮於 1000 毫升的蒸餾水或去離子水中。
2. 攪拌均勻： 使用磁力攪拌器徹底攪拌至完全澄清。
3. 高壓滅菌： 分裝至錐形瓶或血清瓶中，使用滅菌釜以 15 磅壓力（121°C）精準維持 15 分鐘。
4. 添加二價鹽（關鍵）： 滅菌完成後，必須等待肉湯完全冷卻至室溫或 50°C 以下。此時在無菌操作台內，加入上述經過 0.22 μm 微孔濾膜過濾除菌的無菌 2 M 鎂離子溶液，搖勻後即可使用。
   • ⚠️ 注意： 鎂離子絕對不可與基礎鹽類混合後一起高壓滅菌，否則在加熱高溫下會產生不溶性的磷酸鎂/硫酸鎂微沉澱，破壞培養基的澄清度與營養。
5. 衍生規格 SOC 肉湯：
   • 如果在配製好的 SOB 工作液中，再無菌加入葡萄糖使其最終濃度達到 20 mM（約添加 20% 葡萄糖溶液 20 mL），即轉化為 SOC 肉湯（Super Optimal Broth with Catabolic repressor）。SOC 專用於轉型（Transformation）電擊或熱休克後的細菌第一小時「復甦與修復培養」，能極大化提升轉殖菌落數。