📦 胰臟大豆瓊脂培養基(Tryptic Soy Agar, TSA)規格說明書
🔬 一、 標準配方比例(每公升 / 1000 mL)
TSA(又稱 Soybean-Casein Digest Agar, SCDA)是臨床、製藥與工業微生物學中引用規範最嚴格的
「通用型非選擇性固體培養基」。市售標準脫水粉末每公升的標準基礎秤重通常為 40.0 公克:
- 胰酶解酪蛋白(Pancreatic Digest of Casein / Tryptone): 15.0 g(提供高濃度短鏈胜肽與核心有機氮源)
- 木瓜蛋白酶解大豆腖(Papaic Digest of Soybean Meal / Soy Peptone): 5.0 g(提供植物性有機氮、天然醣類與維生素)
- 氯化鈉(Sodium Chloride): 5.0 g(維持穩定的等滲透壓環境)
- 洋菜粉(Bacteriological Agar): 15.0 g(高級固化瓊脂,無營養價值)
- 最終 pH 值(25°C): 7.3 ± 0.2
🧫 二、 微生物培養的核心應用情境
TSA 的營養基底極為豐富,能同時滿足非挑剔性(Non-fastidious)與中度挑剔性微生物的發育需求:
- 1. 國際藥典法定品管基質(Harmonized USP/EP/JP):
- 在歐洲藥典、美國藥典與日本藥局方的協調方法中,TSA 被強制規範為 "Casein soybean digest agar"。
- 專門用於非無菌藥品與生物製劑的總好氧微生物計數(Total Aerobic Microbial Count, TAMC)與無菌生長促進試驗(Growth Promotion Test)。
- 2. 生技藥廠環境監控(Environment Monitoring):
- 廣泛製成標準培養皿或接觸板(Contact Plates),配合主動或被動落菌測試,用以量測無塵室(Clean Rooms)、隔離設備與製程人員表面的微生物殘留 traces。
- 3. 臨床血液瓊脂底物(Blood Agar Base):
- 由於配方中不添加任何醣類(如葡萄糖),高壓滅菌冷卻後外加 5%–7% 脫纖維綿羊血,即可無干擾地用於觀察致病菌(如鏈球菌)的α、β、γ 溶血反應(Hemolysis)。 [
- 4. 化妝品與食品安全檢驗:
- 符合 ISO 21149 規範,是化妝品與好氧中溫菌(Aerobic mesophilic bacteria)計數與檢測的指定平板。
🛠️ 三、 工業級衍生修飾配方
為了因應高污染環境或特定消毒劑殘留的表面採樣,TSA 常會進行以下化學修飾:
- 中和劑添加(TSA + Lecithin + Tween 80):
- 額外添加 0.7 g/L 卵磷脂(Lecithin)與 5.0 g/L 聚山梨醇酯 80(Tween 80)。
- 機制: 能在環境採樣時,即時中和季銨鹽類、酚類、酒精及其他化學消毒劑的殘留活性,防止殘留消毒劑抑制細菌發育,確保品管計數的準確性。
🧪 四、 標準實驗室製備與滅菌操作規範(Directions)
- 懸浮溶解: 秤取 40.0 公克 的預混 TSA 脫水粉末,完全懸浮於 1000 毫升的蒸餾水或去離子水中。
- 加熱煮沸: 使用磁力加熱攪拌器邊攪拌邊加熱至沸騰維持 1 分鐘,確保洋菜粉完全膠化、不溶性顆粒徹底溶解澄清。
- 高壓滅菌: 使用滅菌釜以 15 磅壓力(121°C)精準維持 15 分鐘。
- 倒板規範: 滅菌完成後,讓培養基在 50°C 恆溫水浴槽中冷卻至約 45–50°C(此時為添加無菌動物血液或特定選擇性抗生素的唯一時機)。充分搖勻後在無菌操作台內倒入無菌 Petri 培養皿中(每片約 20–25 mL),凝固後倒置存於 4°C 冰箱中防潮保存。