LB Broth (Lysogeny Broth / Luria-Bertani Medium) 規格說明書
🔬 一、 標準配方比例(每公升 / 1000 mL)
在工業脫水粉末調配中,標準 Miller 配方總重為 25.0 公克:
- 胰蛋白腖(Tryptone / Casein Enzymic Hydrolysate): 10.0 g(提供胜肽與胺基酸來源)
- 酵母萃取物(Yeast Extract): 5.0 g(提供維生素 B 群與微量元素)
- 氯化鈉(Sodium Chloride): 10.0 g(提供鈉離子並維持滲透壓平衡)
- 最終 pH 值(25°C): 7.0 ± 0.2
⚖️ 二、 Lennox 與 Miller 配方的規格對比
液態培養基中,氯化鈉(NaCl)的濃度會直接影響導電率(Electrical Conductivity),選型依據如下:
- LB Broth, Miller(高鹽):
- NaCl 含量: 10.0 g/L(總秤重 25.0 g/L)
- 技術特點: 提供標準的高滲透壓(Osmotic Equilibrium),是常規培養、質體複製(Plasmid Amplification)的通用規格。
🧬 三、 成分生化功能與突變株補償機制
- Casein Enzymic Hydrolysate(酶解酪蛋白):
- 透過胰酶溫和消化,完整保留了色胺酸(Tryptophan),提供大腸桿菌最即時、免耗能分解的小分子胜肽。
- Yeast Extract(酵母萃取物):
- 富含維生素 B 群(Vitamin B Complex)。由於很多重組大腸桿菌(如衍生自 E. coli K12 的菌株)具有特定基因突變,属于營養缺陷型(Auxotrophic Strains),無法自行合成維生素 B,因此必須由酵母萃取物進行營養補償,菌株才能正常分裂。
- Sodium Chloride(氯化鈉):
- 維持細胞膜內外的滲透壓,並提供鈉離子以供細菌細胞進行細胞膜物質運輸(Membrane Transport)。
🧪 四、 標準配制與滅菌操作(Directions)
- 配製: 秤取 25.0 公克(Miller)或 20.0 公克(Lennox)的預混粉末,完全溶解於 1000 毫升的蒸餾水或去離子水中。
- 溶解: 使用磁力攪拌器攪拌至澄清,不需如同固體洋菜般進行加熱煮沸即可完全溶解。
- 滅菌: 分裝至試管或血清瓶,使用高壓滅菌釜以 15 磅壓力(121°C)維持 15 分鐘。
- 抗生素添加: 滅菌後置於室溫。若需加入熱敏感抗生素(如 Ampicillin、Kanamycin),必須等待肉湯降溫至 50°C 以下(或室溫)後方可加入,避免高溫導致抗生素熱降解失