Modified Lowry Protein Assay Kit（改良型 Lowry 蛋白質定量試劑盒，如貨號 SK4041）是一種常用於生物化學與分子生物學實驗中的蛋白質濃度測定工具。

以下為該產品的核心資訊與特點總結：

1. 檢測原理

• 基本原理：基於傳統 Lowry 蛋白質定量法。蛋白質在鹼性溶液中與銅離子反應形成四齒銅-蛋白質複合物，隨後加入 Folin-Phenol 試劑（福林酚試劑），反應生成藍色水溶性產物，並在 750 nm 波長下吸光度達到最大值。吸光度的增加與蛋白質含量成正比。

• 改良特色：傳統 Lowry 法容易受到還原劑、螯合劑（如 DTT、EGTA）、強酸強鹼、游離酪胺酸或尿酸等物質的嚴重干擾。此改良型試劑盒特別包含專利蛋白質沉澱/清除試劑，可在顯色前有效去除絕大部分干擾物質，確保測量結果的準確性。
   

一、 準備工作與試劑配置

1. 樣品準備

   • 將蛋白質樣品用適當緩衝液稀釋至適宜濃度範圍（線性範圍：5-100ug/ml

2. 標準品配製 (BSA Standard)

   • 使用牛血清蛋白（BSA）標準品，以同種樣品緩衝液梯度稀釋成一系列標準濃度（如：$0, 5, 10, 20, 40, 60, 80, 100 ug/mL，作為標準曲線繪製依據。

二、 實驗操作步驟

Step 1：樣品預處理與去除干擾物（沉澱步驟）

1. 取各濃度標準品及待測樣品各  1.0 mL 加入離心管中。

2. 加入試劑盒專用的蛋白質沉澱/清除試劑（Proprietary Protein Reagent），充分混勻。

3. 室溫下靜置反應 10-15 分鐘後，高速度離心（約 10,000 –12,000x g）離心 5 分鐘，使蛋白質沉澱至管底。

4. 仔細吸棄上清液（去除還原劑 DTT、螯合劑 EGTA、強酸強鹼等化學干擾物質）。

Step 2：顯色反應

1. 溶解沉澱與鹼性銅反應：

   • 加入鹼性銅試劑（Alkaline Copper Reagent）溶解蛋白質沉澱，充分漩渦振盪（Vortex）至混勻。

   • 室溫下靜置反應  10 –15 分鐘，形成四齒銅-蛋白質複合物。

2. 加入福林酚試劑 (Folin-Phenol Reagent)：

   • 快速加入適量 Folin-Phenol 試劑並立即混勻。

   • 室溫下避光靜置反應  30 分鐘，溶液將逐漸生成水溶性藍色產物。

三、 吸光度測定與數據分析

1. 測量吸光度

   • 使用分光光度計或微孔板讀數儀（Microplate Reader），設定檢測波長為 750 nm}。

   • 以空白對照組（ 0 g/mL}）進行歸零後，歸一化測定各標準品與待測樣品的吸光度（A 750 ）。

2. 濃度計算

   • 以 BSA 標準品濃度為 X 軸、A 750  吸光度為 Y 軸繪製標準曲線並進行線性迴歸。

   • 將待測樣品的吸光度代入標準曲線方程式，計算出待測樣品的蛋白質濃度（若有預先稀釋，請再乘以稀釋倍數）。

💡 注意事項

• 快速混勻：加入 Folin-Phenol 試劑時必須迅速混勻，因為該試劑在鹼性環境中半衰期較短。

• 沉澱完全：離心後棄去上清液時請儘量吸乾，避免殘留過多含有干擾物的上清液影響測定結果。

實驗室常見蛋白質定量法對比
在選擇 Modified Lowry 之前，研發人員常與其他常見定量法進行評估：