Bio-Bradford 分析緩衝液-1000R 產品技術規格書

一、 產品基本資料

• 產品名稱：Bio-Bradford 分析緩衝液-1000R (Bio-Bradford Assay Buffer-1000R)
• 產品編號：Bio-BRAD-1000R
• 包裝規格：1000R / 200 mL（即開即用型 1X 工作液，可供 1000 次微量盤檢測）
• 研發廠牌：Biokit
• 檢測波長：595 nm
• 儲存條件：4°C 冷藏儲存，避光保存。
• 產品用途：本產品僅限科學研究與實驗室研發使用，不得用於臨床診斷、人體或動物之醫療與食品。

• 檢測原理：基於經典的 Bradford 染料結合法。在酸性溶液中，考馬斯亮藍 G-250（Coomassie Brilliant Blue G-250）游離狀態下呈棕紅色（最大吸收波長 465 nm）；當其與蛋白質的鹼性及芳香族胺基酸殘基結合後，會迅速轉變為穩定藍色複合物（最大吸收波長 595 nm），藍色深淺與蛋白質濃度呈正比。
• 核心改良配方：本分析緩衝液經過特別優化調配，大幅降低了傳統 Bradford 試劑中常見的甲醇（Methanol）等高毒性有機溶劑與生物危害物質，同時顯著提升了呈色穩定性、檢測靈敏度與反應後的色澤轉變（Color Switch）對比度。
• 試劑外觀：澄清至微帶棕紅色之酸性水性溶液。

• 高通量快速總蛋白質定量：
  • 適用於快速測定各類細胞裂解液、組織勻漿、部分純化或重組蛋白樣本的總蛋白濃度。
• 高濃度還原劑樣本定量：
  • 具備極佳的化學物質相容性，不受樣品或緩衝液中常見還原劑（如 DTT、DTE、2-Mercaptoethanol）的干擾，特別適合用於需要添加還原劑以維持蛋白穩定性的純化後樣本。
• 微量盤與常規吸光值檢測：
  • 反應過程極速，加入試劑混合 5 分鐘後即可直接讀值。相容於常規 96 孔微孔板（Microplate Assay）與標準分光光度計比色皿（Tube Assay）操作流程。

• 步驟一：試劑回溫與混勻
  • 實驗前將 Bio-Bradford 分析緩衝液自 4°C 取出，置於室溫回溫，並於使用前溫和翻轉混勻，以分散可能存在的微小染料聚合體。
• 步驟二：製備序列稀釋標準品
  • 使用與待測樣本相同的緩衝液，將 2 mg/mL BSA 標準品稀釋至所需濃度區間（建議檢測線性範圍通常落於 100 – 1500 µg/mL 內）。
• 步驟三：加樣反應
  • 於 96 孔微孔板的對應孔中，分別加入 20 µL（或依據優化條件加入 10–30 µL）的各濃度標準品或待測樣本。
  • 每孔各加入 200 µL（或依試樣比例加入 1.5 mL 於試管法）的 Bio-Bradford 分析緩衝液，使用微孔板振盪器輕柔混合。
• 步驟四：溫育與讀值
  • 於室溫下溫育 5 分鐘（反應色澤在 5 至 60 分鐘內皆可維持高度穩定）。
  • 使用酶標儀讀取 595 nm 處的吸光度值，扣除空白對照值（0 µg/mL）後繪製標準曲線，即可精準反推樣品中的蛋白質濃度。

• 高度敏感干擾物（極易引發呈色變異，需避免使用或大幅稀釋樣品）：
  • 所有離子型與非離子型去污劑（如 SDS、Triton X-100、Tween-20），這些去污劑會與染料競爭或導致染料直接沉澱。
• 可耐受之緩衝液與化學成分（低於上限有 minor 可容忍效應）：
  • EDTA、葡萄糖（Glucose）、DTT、2-Mercaptoethanol 等。當樣本中含有這些成分時，建議在稀釋 BSA 標準品時加入同等濃度的對應成分以完全抵消基質誤差。

• 嚴防起泡與溫和混勻：
  • 考馬斯亮藍試劑在劇烈震盪下極易產生大量氣泡。加樣混合時切勿使用 Vortex 強力震盪，應使用移液管輕柔吹吸或微孔板慢速振盪，若有氣泡產生須在讀值前用乾淨針尖刺破，以免嚴重影響 595 nm 的 OD 讀數。
• 樣品高濃度稀釋原則：
  • 若待測樣品的蛋白質濃度高於標準曲線的線性上限（發生吸光度飽和、曲線變平），將會嚴重低估實際蛋白質總量。此時必須將樣品以原緩衝液進行適當倍數稀釋後，再重新進行檢測。
• 標準曲線建構演算法：
  • 由於 Bradford 呈色在大分子飽和時會呈現微幅非線性彎曲，若使用微孔板讀數軟體進行擬合，建議優先選擇四參數（Quadratic/4PL）或最佳擬合曲線；若手動繪製，點對點（Point-to-point）連線會比單純的線性回歸（Linear fit）更為精準。