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| JM109 勝任細胞 |
產品編號 : HD-JM109TM
產品規格 : 10x100uL/vial
廠 牌 : Hyperdimension |
| 詳細資料 |
一、 產品基本資料
產品名稱：JM109 感受態細胞 (JM109 Competent Cells)
產品類型：大腸桿菌 K12 衍生菌株高效克隆與常規亞選殖菌株
轉化效率：大於 1 x 10^8 cfu/µg
產品外觀：低溫凍存之不透明冰狀固體
儲存條件：-80°C 恆溫超低溫冷凍保存，嚴禁儲存於 -20°C，且須避免任何溫度波動。
運輸條件：全程使用乾冰運輸。
產品用途：本產品僅限科學研究與實驗室研發使用，不得用於臨床診斷、人體或動物之醫療與食品。
二、 基因型與化學性質
關鍵基因型特徵：endA1, recA1, gyra96, thi-1, hsdR17, relA1, supE44, Δ(lac-proAB), [F′, traD36, proAB+, lacIqZΔM15]
藍白篩選支持：細胞攜帶 F′ 附加體，內含 lacIqZΔM15 基因片段，配合適當選殖載體時，可支持 α-互補作用，使用 X-Gal 即可對重組 DNA 進行直觀的藍白篩選。
重組缺陷特性：攜帶 recA 突變，該基因失活能最大程度減少細菌體內的同源重組反應，從而確保嵌入外源 DNA 片段的穩定性。
核酸酶缺陷特性：攜帶 endA 突變，使胞內非特異性核酸內切酶 I 失活，能顯著提升從小量製備中纯化出的質體 DNA 的品質與純度。
抗生素敏感性：JM109 菌株對所有常規抗生素皆具備完全的敏感性（不具備天然抗藥性基因）。
三、 核心實驗應用情境
日常常規亞選殖與克隆：作為實驗室極受歡迎的日常基因選殖大腸桿菌菌株，適用於各種常規重組質體的構建與藍白篩選。
單鏈 DNA 救援與製備：當與 M13 噬菌體系統或噬菌體質體（Phagemid）系統同時使用時，可用於單鏈 DNA（Single-stranded DNA rescue）的回收與製備。
高純度質體 DNA 提取：由於 endA 突變阻斷了質體提取過程中的 DNA 降解，純化出的質體可直接用於下游的限制酶切或序列測定。
四、 標準操作步驟
步驟一：感受態細胞解凍
自 -80°C 超低溫冰箱中取出 JM109 感受態細胞，立即置於冰浴中使其緩慢融化。完全融化後即可進行下一步，全程請溫和操作，嚴禁使用微量震盪器劇烈漩渦混勻。
步驟二：加樣與冰浴
向融化後的感受態細胞中加入適量待轉化的連接產物或質體 DNA，用手指輕彈管壁混勻。將管置於冰浴中靜置 25 到 30 分鐘。
步驟三：熱休克與復甦
將管迅速移至 42°C 水浴中進行熱休克，時間必須精準控制在 45 秒，隨後立即移回冰浴中冷卻 2 分鐘。在無菌條件下向管中加入 500 µL 不含抗生素的 SOC 或 LB 液體培養基，置於 37°C 振盪培養箱中，以 150 到 200 rpm 復甦培養 60 分鐘。
步驟四：塗布培養
取適量復甦後的菌液，塗布於含有對應抗生素（如需要藍白篩選，則需預先塗布 X-Gal 和 IPTG）的固體培養基平板上。將平板倒置放入 37°C 培養箱中，培養 12 到 16 小時直至單菌落形成。
五、 核心操作注意事項
抗生素選擇性限制：由於 JM109 菌株對所有常規抗生素皆敏感，因此挑選轉化子時，固體培養基中加入的抗生素種類必須完全依賴於您所構建的質體載體抗性（如 Amp 或 Kan）。
溫度與凍融敏感性：JM109 感受態細胞對溫度波動極度敏感。必須即開即用，嚴禁反覆凍融。
熱休克時間精準度：42°C 熱休克的時間是轉化成功的關鍵。少於 45 秒會導致質體未能成功進入細胞，多於 45 秒則會造成細菌大量死亡。
吸取溫和原則：感受態細胞在融化狀態下細胞壁極度脆弱。吸取時請慢吸慢放，使用微量移液管混勻時動作必須極度輕柔，避免剪切力造成細菌破裂。 |
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