二、 化學與物理性質
化學組成:由野生型拉姆達噬菌體 DNA 經 Hind III 限制酶完全消化切斷後精準純化而成,預先溶解於含有甘油、EDTA 及電泳指示染料的緩衝液中。
溶劑系統:即用型配方(Ready-to-Load),專門針對電泳注膠設計,無需額外添加上樣緩衝液即可直接加樣。
酶活性殘留:經嚴格品質控管,無任何外源脫氧核糖核酸酶與蛋白酶活性殘留。
三、 核心實驗應用情境
大分子量核酸電泳大小比對:專為瓊脂糖凝膠電泳設計,特別適合用於精準測定大片段質體、黏質體、基因組 DNA 剪切片段或大分子量 PCR 產物的大小。
低濃度膠體分離對照:適用於 0.6% 到 1.0% 的低濃度瓊脂糖凝膠,能將 2,027 bp 至 23,130 bp 之間的大分子量片段清晰分離。
限制酶切反應對照:在分子選殖與核酸定性實驗中,作為評估限制酶消化效率的經典對照。
四、 標準操作步驟
步驟一:特異性熱變性處理
由於拉姆達噬菌體 DNA 兩端帶有互補黏性末端,在儲存過程中 4,361 bp 與 23,130 bp 條帶易發生自發性黏合,且 2,027 bp 與 2,322 bp 亦可能部分締合。
吸取當次所需上樣量,於 65°C 恆溫加熱 5 分鐘,隨後立即置於冰浴中急速冷卻至少 2 分鐘。
此熱變性步驟能徹底解開互補黏性末端,確保 7 條條帶在電泳時呈現理論分子量與精準條帶強度。
步驟二:加樣電泳
專門針對電泳注膠設計,直接使用微量移液管吸取上述經冰浴冷卻後的溶液,注入已預備好的凝膠孔中。常規電泳每孔建議上樣量為 5 µL。
步驟三:影像擷取
電泳結束後,置於紫外線凝膠成像儀或藍光透射儀下進行觀測與拍照。
五、 核心操作注意事項
必須進行 65°C 熱變性:若忽略 65°C 加熱處理,電泳後將會發現 23,130 bp 的條帶強度異常減弱,且在更高分子量處出現不正常雜帶,進而影響分子量判定。
膠體濃度限制:本產品不適用於 1.5% 以上的高濃度瓊脂糖凝膠。在高濃度膠體中,大片段(9,416 bp 到 23,130 bp)會因遷移阻力過大而擠壓在孔沿附近無法有效分開,且 564 bp 最小條帶易跑出膠外。
防止外源核酸酶污染:吸取時務必配戴無粉手套,並使用乾淨無酶的移液管尖,避免環境中的脫氧核糖核酸酶進入管內引發 DNA 降解。
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