2.5mM /1ml---現貨

10mM dNTP (2.5mM each) 產品名稱 ： 10mM dNTP (2.5mM each) 產品編號 ： Bio-NTP-2.5 產品規格 ： 10mM/1mL 廠    牌 ： Biokit 詳細資料   10mM 去氧核糖核苷三磷酸預混液 產品技術規格書 一、 產品基本資料 產品名稱：10mM 去氧核糖核苷三磷酸預混液 (10mM dNTP Mixture) 標準濃度：總濃度為 10 mM，內含 dATP、dTTP、dGTP、dCTP 各 2.5 mM 包裝規格：1.0 mL / 支 產品外觀：澄清無色水性溶液 酸鹼度：pH 7.0 - 7.5 儲存條件：-20°C 恆溫冷凍保存，避免存於無霜冰箱的自動除霜區。 運輸條件：維持全程乾冰或低溫冰寶運輸。 產品用途：本產品僅限科學研究與實驗室研發使用，不得用於臨床診斷、人體或動物之醫療與食品。 二、 化學與物理性質 化學組成：2′-Deoxynucleoside 5′-triphosphates 四種鈉鹽的等莫耳預混溶液。 核苷酸純度：經高效液相層析檢測，四種單一核苷酸純度均大於 99.0%，且配比精準為 1 比 1 比 1 比 1。 酶活性殘留：經嚴格品質控管，無可偵測之脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶與蛋白酶活性，且無細菌與人體基因體 DNA 殘留。 化學穩定性：在高純度與無菌生理 pH 緩衝液保護下，於 -20°C 可維持數年穩定。經測試，反覆凍融 20 次以內無明顯降解現象。 三、 核心實驗應用情境 常規與常規聚合酶鏈鎖反應：作為 DNA 聚合酶延伸胜肽鏈的核心原料，2.5 mM 各成分的預混設計免去了繁瑣的單體混合步驟，利於直接調配各類常規 PCR 擴增反應系統。 反轉錄與互補去氧核糖核酸合成：四種核苷酸精準等莫耳配比，用於高純度一條鏈或二條鏈 cDNA 的高效合成，可完整確保低豐度轉錄本的擴增效率。 核酸定序與末端標記：適用於次世代定序文庫構建、DNA 缺口平移標記以及末端去氧核苷酸轉移酶尾端標記實驗。 四、 標準配置指南 本產品為四種核苷酸均已混合好的 2.5 mM 各成分預混液，操作前無需自行稀釋： 常規 50 µL PCR 反應系統上樣推薦：在 50 µL 的 PCR 反應總體積中，直接加入 4 µL 本產品，此時最終反應濃度即為每種核苷酸各 0.2 mM，此為絕大多數 DNA 聚合酶的最佳催化反應濃度。 微量 25 µL PCR 反應系統上樣推薦：在 25 µL 的 PCR 反應總體積中，直接加入 2 µL 本產品，即可達到每種核苷酸各 0.2 mM 的最佳催化反應濃度。 五、 高 GC 含量或大片段 PCR 的 dNTP 濃度調校建議 高 GC 含量模板的調校： 維持基礎濃度，但必須搭配特殊的等價物或共溶劑。 本產品直接上樣至最終反應濃度每種 0.2 mM 到 0.25 mM 之間即可。盲目提高 dNTP 濃度會大量游離螯合系統中的鎂離子，反而會抑制聚合酶活性。 核心優化策略為使用 7-deaza-dGTP 替代法，由於本產品為預混液，如需替換請在外加反應體系中另外補入 7-deaza-dGTP。 同時建議在反應體系中加入 5% 到 10% 的 DMSO、1 M 的 Betaine 或 5% 的 Glycerol 作為共同溶劑。 超大片段的調校： 大幅提高 dNTP 總體濃度，並同步依比例增加鎂離子。 當擴增片段大於 5 kb 時，常規濃度的 dNTP 容易在電泳延伸後期耗盡。 建議調高本產品上樣量，將每種單一 dNTP 的最終反應濃度提高至 0.35 mM 至 0.5 mM，即 50 µL 反應系統中改為加入 7 µL 到 10 µL 本產品。 由於每一個 dNTP 分子都會依 1 比 1 的比例螯合一個鎂離子，當您調高 dNTP 濃度時，必須同步調高反應體系中的鎂離子濃度。 若單一 dNTP 最終濃度調高至 0.35 mM，系統的鎂離子最終濃度通常需要同步調高至 1.75 mM 至 2.5 mM。 延伸時間需拉長至每 1 kb 片段給予 30 到 60 秒，並優先選擇具備 3′→5′ 校對活性的高保真融合酶。 六、 核心操作注意事項 交叉污染嚴格防範：dNTP 是 PCR 反應中極易受到微量外源核酸污染的組分。操作時務必配戴無粉手套，並使用帶有濾芯的移液管尖，於無菌操作台內進行分裝或配製。 分裝保存原則：雖然本產品具備良好的抗凍融穩定性，但仍強烈建議首次開封後，依據實驗室日常消耗量，將 1.0 mL 產品分裝成小體積存於 -20°C，以最大程度延長產品壽命。 完全解凍與混勻：自冷凍庫取出使用前，必須確保管內溶液完全解凍。由於預混溶液在解凍過程中易產生濃度梯度，解凍後務必使用微量震盪器短暫混勻並進行瞬間離心使液體集聚管底，再行吸取。 避免酸性環境失活：dNTP 在酸性水溶液中極易發生自發性水解，導致焦磷酸根脫落而失活。稀釋時請務必使用無菌超純水或微鹼性的 Tris 緩衝液。

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10mM dNTP(2.5mM)-Bio-NTP-2.5.pdf	13KB	2013/9/2 下午 02:40:14	下載

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