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| 100mM dNTP (400ulx4) |
產品名稱 ： 100mM dNTP (400ulx4)
產品編號 ： Bio-NTP-100
產品規格 ： 400ulx4
廠 牌 ： Biokit |
| 詳細資料 |
一、 產品基本資料
產品名稱：100mM 去氧核糖核苷三磷酸套組 (100mM dNTP Set)
標準濃度：每管各 100 mM
包裝規格：400 µL x 4 支 / 組（dATP、dTTP、dGTP、dCTP 各 1 支）
產品外觀：澄清無色水性溶液
酸鹼度：pH 7.0 - 7.5
儲存條件：-20°C 恆溫冷凍保存，避免存於無霜冰箱的自動除霜區。
運輸條件：維持全程乾冰或低溫冰寶運輸。
產品用途：本產品僅限科學研究與實驗室研發使用，不得用於臨床診斷、人體或動物之醫療與食品。
二、 化學與物理性質
化學組成：2′-Deoxynucleoside 5′-triphosphates 鈉鹽溶液（包含 dATP、dCTP、dGTP、dTTP）。
核苷酸純度：經高效液相層析檢測，各單一核苷酸純度均大於 99.0%。
酶活性殘留：經嚴格品質控管，無可偵測之脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶與蛋白酶活性，且無細菌與人體基因體 DNA 殘留。
化學穩定性：在高純度與無菌生理 pH 緩衝液保護下，於 -20°C 可維持數年穩定。經測試，反覆凍融 20 次以內無明顯降解現象。
三、 核心實驗應用情境
高產量與長片段聚合酶鏈鎖反應：作為 DNA 聚合酶延伸胜肽鏈的核心原料，100 mM 的高濃度設計極利於調配各類高通量或大體積 PCR 擴增反應系統。
反轉錄與互補去氧核糖核酸合成：用於高純度一條鏈或二條鏈 cDNA 的高效合成，可完整確保低豐度轉錄本的擴增效率。
核酸定序與末端標記：適用於次世代定序文庫構建、DNA 缺口平移標記以及末端去氧核苷酸轉移酶尾端標記實驗。
四、 標準配置指南
由於本產品提供的是 4 管分開的高濃度單體，研發人員可依據實驗需求混合成即用型的工作液：
配置 10 mM 即用型 dNTP Mixture (每種各 10 mM)：取 10 µL dATP + 10 µL dCTP + 10 µL dGTP + 10 µL dTTP，加入 60 µL 無菌超純水，混合均勻即可。
常規 50 µL PCR 反應系統上樣推薦：在 50 µL 的 PCR 反應總體積中，加入 1 µL 上述已配置好的 10 mM dNTP Mixture（最終反應濃度為每種核苷酸各 0.2 mM），此為絕大多數 DNA 聚合酶的最佳催化反應濃度。
五、 高 GC 含量或大片段 PCR 的 dNTP 濃度調校建議
高 GC 含量模板的調校：
維持基礎濃度，但必須搭配特殊的等價物或共溶劑。
維持常規的單一 dNTP 濃度於 0.2 mM 至 0.25 mM 之間即可。盲目提高 dNTP 濃度會大量游離螯合系統中的鎂離子，反而會抑制聚合酶活性。
核心優化策略為使用 7-deaza-dGTP 替代法，建議調配比例為 7-deaza-dGTP 比 dGTP 等於 3 比 1。該類似物能顯著降低 G-C 鹼基對之間的熱穩定性，阻止二次結構形成。
同時建議在反應體系中加入 5% 到 10% 的 DMSO、1 M 的 Betaine 或 5% 的 Glycerol 作為共同溶劑。
超大片段的調校：
大幅提高 dNTP 總體濃度，並同步依比例增加鎂離子。
當擴增片段大於 5 kb 時，常規濃度的 dNTP 會在電泳延伸後期耗盡。建議將每種單一 dNTP 的最終反應濃度提高至 0.35 mM 至 0.5 mM。
由於每一個 dNTP 分子都會依 1 比 1 的比例螯合一個鎂離子，當您調高 dNTP 濃度時，必須同步調高反應體系中的鎂離子濃度。
若 dNTP 最終濃度調高至 0.35 mM（總 dNTP 濃度 1.4 mM），系統的鎂離子最終濃度通常需要同步調高至 1.75 mM 至 2.5 mM。
延伸時間需拉長至每 1 kb 片段給予 30 到 60 秒，並優先選擇具備 3′→5′ 校對活性（Proofreading activity）的高保真融合酶。
六、 核心操作注意事項
交叉污染嚴格防範：高濃度 dNTP 是 PCR 反應中極易受到微量外源核酸污染的組分。操作時務必配戴無粉手套，並使用帶有濾芯的移液管尖，於無菌操作台內進行分裝或配製。
分裝保存原則：雖然本產品具備良好的抗凍融穩定性，但仍強烈建議首次開封後，依據實驗室日常消耗量，將 400 µL 產品分裝成小體積（例如 50 – 100 µL / 支）存於 -20°C，以最大程度延長產品壽命。
完全解凍與混勻：自冷凍庫取出使用前，必須確保管內溶液完全解凍。由於高濃度溶液在解凍過程中易產生濃度梯度，解凍後務必使用微量震盪器短暫混勻並進行瞬間離心使液體集聚管底，再行吸取。
避免酸性環境失活：dNTP 在酸性水溶液中（pH < 6.0）極易發生自發性水解，導致焦磷酸根脫落而失活。稀釋時請務必使用無菌超純水（pH 7.0 - 7.5）或微鹼性的 Tris 緩衝液。
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 產品相關檔案 |
| 檔案名稱 |
檔案大小 |
上傳時間 |
下載 |
| 100mM dNTP/400ul*4-100 mM dNTP.pdf |
14KB |
2013/9/2 下午 02:28:00 |
下載 |
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 購物說明： |
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