細胞核蛋白萃取套組（Cell Nuclear Protein Extraction kit，編碼：Bio-PNF-20）專門用於從哺乳類細胞中快速分離並萃取細胞核蛋白（Nuclear Proteins）。
1. 產品基本規格

• 產品名稱： Cell Nuclear Protein Extraction kit
• 產品編碼： Bio-PNF-20
• 反應規格： 20 R（20 次萃取）
• 品牌： Biokit
• 儲存條件： 4 ℃ 冷藏保存
• 售價： 來電洽詢

1. 差異性裂解技術（Differential Lysis Technology）：
   • 透過兩步驟專一性裂解，先通透細胞膜釋放細胞質蛋白（Cytosol），隨後破壞核膜溶解細胞核蛋白（Nuclear fraction）。
2. 免去超速離心（Ultracentrifugation-Free）：
   • 無需繁瑣耗時的密度超速離心（Density ultracentrifugation），只需搭配一般的桌上型冷凍微量離心機，在低速離心條件下即可順利完成細胞次分級萃取。
3. 快速高效：
   • 全程操作時間可以在 1 小時內 完成，極為簡便且具備良好可重複性。

• 西方墨點法（Western Blotting）： 分析轉錄因子（Transcription Factors）或核內標誌蛋白（如 Histone H3、Lamin B1）表現。
• 凝膠電泳遷移率變更分析（EMSA / Gel Shift Assay）： 研究蛋白質與 DNA 的結合活性。
• 酵素活性測定（Enzyme Activity Assays）： 測定核內酵素（如 DNA 聚合酶、脫乙醯酶等）活性。
• 雙向電泳（2-D Gel Electrophoresis）： 進行核蛋白體（Nuclear Proteome）差異分析。

1. 收集 5 x 10⁶ 個細胞（或在 10 公分培養皿中接近滿盤），用 PBS 清洗兩次。若是貼壁培養細胞，清洗後直接將細胞刮下來，請勿使用胰蛋白酶或其他酵素來使細胞剝離。
2. 每5 x 10⁶ 個細胞加入 600 微升 試劑 A。
3. 震盪（Vortex）5 秒鐘，在冰上放置 5 分鐘，然後再震盪 5 秒鐘。
4. 步驟 3 之後，直接以 2000 rpm 離心 2 分鐘。
5. 在步驟 4 之後，收集沉澱部分，對每個步驟 4 的沉澱部分加入 600 微升試劑 B，震盪使其成為均勻的溶液。
6. 以 8000 rpm 離心 8 分鐘，收集沉澱部分。
7. 並對每個步驟 7 的沉澱部分加入 400 微升 試劑 C。
8. 震盪直到步驟 7 的沉澱部分從緻密結構在溶液中變成鬆散狀態
9. 以 13000 rpm 離心 12 分鐘。
10. 步驟 10 之後，澄清的部分即為核蛋白裂解液。

1. 在步驟 4上清液部分轉移至另一支試管中, 後進行另一次 8000 rpm、8 分鐘的離心，再將其上清液收集,此上清液即為細胞質部分蛋白。

• 萃取出的蛋白質樣品可立即進行定量（如 BCA 或 Bradford assay，注意確認 Buffer 中的界面活性劑是否影響定量）。
• 若不立即使用，請將蛋白分裝後儲存於 -80 ℃，避免反覆冷凍解凍。