Trypan Blue (台盼藍)
是一種偶氮類（Diazo dye）酸性親水性染料，
化學式為 C34H24N6N4O14S4
分子量約  960.81

物理與化學性質

• 外觀與溶解性：藍色至暗藍色粉末，極易溶於水，水溶液呈深藍色。

• 帶電與分子結構：含有四個磺酸基團（-{SO}3\Na），在水溶液中高度解離帶負電荷，具有強烈的親水性與負電荷特徵。

• 膜通透選擇性：由於分子量較大且帶負電，無法透過結構完整、具選擇通透性的活細胞膜；當細胞死亡或膜受損時，染料方能穿透細胞膜進入胞內。

生物醫學主要用途

• 細胞存活率分析與排除法（Cell Viability & Exclusion Assay）：

  • 原理：死細胞的細胞膜破裂失能，Trypan Blue 滲入細胞質與蛋白質結合，使死細胞染成藍色；活細胞則保持無色透明。

  • 應用：廣泛用於血球計數板（Hemocytometer）及自動細胞計數器中的細胞計數與存活率計算。

• 眼科手術組織染色（Ophthalmic Surgery）：

  • 用於白內障手術中輔助囊膜切開術（Capsulorhexis），對晶狀體前囊膜進行對比染色，提高手術視野清晰度。

• 組織學與神經科學：

  • 作為血管通透性評估探針，用以研究腦血管障壁（BBB）的破壞程度與通透性變化。

使用情境限制與注意事項

• 長時間孵育的細胞毒性：

  • Trypan Blue 對活細胞具有微弱的細胞毒性。若細胞在染料中放置過久（超過 3–5 分鐘），活細胞也會逐漸吸收染料或受毒性影響死亡，導致假陰性（存活率被低估）。

• 蛋白與背景干擾：

  • 樣品中若含有高濃度血清或游離蛋白質（如 BSA），Trypan Blue 會與其非特異性結合產生背景沉澱，干擾顯微鏡觀察與計數。

• 細胞碎片與結晶誤判：

  • 試劑保存時間較長時易產生微小沉澱，易被誤認為死細胞；使用前建議過濾（0.22 um）。

• 潛在毒性與防護：

  • Trypan Blue 被列為潛在致癌物與致畸原，操作粉末及高濃度溶液時應於通風櫃內進行，並配戴手套與護目鏡。