Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide (MTT, 噻唑藍) 的詳細物理化學性質、生物醫學用途以及實驗使用情境限制與注意事項整理如下：

基本物理與化學性質

• 化學名稱： 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide
  
  英文名稱：MTT；Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide；3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide；Thiazolyl blue；Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide
  
  其他名稱：3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑噻唑藍；噻唑蘭；溴化噻唑藍四氮唑；3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-2H-四氮唑鎓溴化物；2-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-3,5-二苯基-2H-四唑氫溴酸鹽

• CAS 號碼： 298-93-1

• 分子式 / 分子量：C18H16BrN5S=414.32

• 外觀與純度： 淡黃色、黃色或橙黃色粉末，純度 $\ge 98.0\%$ (BR級)。

• 溶解性： 微溶於甲醇，難溶於水或乙醇；不溶於乙醚、丙酮或乙酸乙酯。在 195°C 或特定條件下可溶於水，常用 DMSO 配製。一般實驗室會將其調製為 5 mg/mL 的 PBS 儲備液。

• 品質指標： 重金屬 >5 ppm 水分  0.5 %。

• 熔點與保存： 熔點 195°C (分解)；建議保存於 2–8°C 並嚴格避光。

生物醫學用途

• 細胞活力與增殖檢測 (MTT Assay)： 利用帶正電荷的 MTT 穿過活細胞膜，被活細胞線粒體中的脫氫酶 (Dehydrogenase) 還原成不溶於水的紫色 甲臢 (Formazan) 結晶。再加入有機溶劑 (如 DMSO) 溶解結晶後，透過 570 nm 吸光度量測細胞相對活力與增殖狀況。

• 細胞毒性測試： 評估藥物、抗生素或化學物質對細胞的毒性反應與 IC₅₀值。

• 酵素活性與輔酶測定： 用於檢測脫氫酶活性、心肌黃酶 (Diaphorase) 以及還原型輔酶 NADH2 和 NADPH 2 的生成量。

使用情境限制與注意事項

• 無法用於終點活細胞後續培養： MTT 還原過程中形成的 Formazan 結晶會對細胞膜造成破壞並具細胞毒性，反應完成後細胞即死亡，因此該細胞樣本無法用於後續的其他功能性實驗。

• 干擾因子控制：

  • 還原性物質干擾： 若培養基中含有強還原劑 (如 Vitamin C、DTT、巰基乙醇等)，會直接將 MTT 還原為紫色，導致假陽性。

  • 微生物污染： 細菌或真菌同樣含有脫氫酶，會還原 MTT 造成實驗誤差，操作時需確保無菌。

  • 酚紅與懸浮細胞影響： 培養基中的酚紅可能干擾光學比色；懸浮細胞在抽離上清液時易流失 Formazan 結晶，建議使用 CCK-8 或水溶性四氮唑鹽 (如 XTT/WST-1) 替代。

• 避光與配置保存： MTT 對光極為敏感，母液 (5 mg/mL) 需過濾除菌並用鋁箔紙包覆避光，長期保存建議分裝凍存於 -20°C，避免反覆凍融導致失效。

• 安全防護： MTT 具有一定的潛在細胞毒性與刺激性，配製粉末時應於通風櫃內配戴口罩與手套操作。