即 Deoxyribonuclease I，是一種可以消化單鏈或雙鏈 DNA 產生單去氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I 水解單鏈或雙鏈 DNA 後的產物，5' 端為磷酸基，3' 端為羫基。DNase I 活性依賴於鈣離子，並能被美離子或二價鎂離子激活。鎂離子存在條件下，DNase I 可隨機剪切雙鏈 DNA 的任意位點；二價錳離子存在條件下，DNase I 可在同一位點剪切 DNA 雙鏈，形成平末端，或 1-2 個核苷酸突出的黏末端。特點為不含 RNase (RNase free)，可以用於各種 RNA 樣品的處理。