QuantscriptRTKit(cDNA第一鏈合成試劑盒)是專為兩步法RT-PCR第一步實驗配製的,具有高靈敏度的RT-PCR反應系統,可以從極低量的TotalRNA或poly(A)+ RNA合成第一鏈cDNA。該試劑盒中使用的逆轉錄酶QuantReverse Transcriptase與通常使用的Moloney鼠白血病病毒來源的MMLV和鳥成髓細胞病毒來源的AMV不同,是一種使用大腸桿菌工程菌進行重組表達的全新高效逆轉錄酶。該酶能夠高效轉錄多種RNA模板,最大限度將RNA轉錄成cDNA第一鏈。
本產品適用於SYBR Green 法進行模板的螢光定量PCR檢測,RealMasterMix中提供了一種獨特的Hot-start 酶(已獲得專利),我們命名為HotStart TaqDNAPolymerase,該酶與一般Hot-start 酶不同之處在於,一般的Hot-start 酶只在第一步溫度升高之前封閉酶的活性,而HotStartTaqDNAPolymerase利用抑制劑通過溫度調節方式封閉 HotStart TaqDNAPolymerase的底物結合位元點,溫度低於40℃時,形成非活性的酶- 抑制劑複合物,當溫度升高至引子特異性的黏和溫度時,結合平衡向模板-特異性引子複合物形成方向移動,因此最大限度的減少PCR擴增全程中的非特異性擴增產物產生,大大提高了螢光定量PCR反應的精確性。
本產品在RealMasterMix中特別添加了ROX染料,用於消除信號本身以及校正孔與孔之間產生的螢光信號誤差。
反應的buffer系統包含dNTP,增強劑,穩定劑等以提高產物特異性和反應靈敏度。 RealMasterMix擁有特殊的Mg2+自動調節系統,在整個反應過程Mg2+始終保持最佳濃度,提高擴增效率。
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