📦 酵母菌基礎氮源培養基，不含胺基酸（Yeast Nitrogen Base, without Amino Acids / YNB w/o AA）規格說明書

🔬 一、 標準生化特性
Yeast Nitrogen Base without Amino Acids（簡稱 YNB w/o AA）是專門用於酵母菌遺傳學、分子生物學選殖與基因功能篩選的「全人工化學合成最低限度培養基基底（Defined Minimal Medium Base）」。

• 成分完全量化與明確（Defined）： 不同於含有複合酵母萃取物的 YPD 培養基，YNB 是純人工合成的，內含的所有無機鹽、維生素與微量元素之成分與確切濃度完全已知且固定。
• 移除關鍵組分（缺乏組分）： 相較於完全版的 YNB，此規格精確移除了組胺酸（Histidine）、甲硫胺酸（Methionine）與色胺酸（Tryptophan）等所有天然胺基酸，且預設不含任何碳源（如葡萄糖）。
• 保留唯一的無機氮源： 配方中保留了高濃度的硫酸銨（Ammonium Sulfate），作為酵母菌合成自身蛋白質的唯一無機氮源。

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⚖️ 二、 標準 1X 工作液之精確生化組成（每公升 / 1000 mL）
在工業脫水粉末（如 BD Difco、Sigma-Aldrich 或 Formedium）的標準製備中，每公升 1X 工作液內含 6.7 公克 的基礎粉末，其硬核化學組成如下：

• 唯一氮源： 硫酸銨（Ammonium Sulfate）5.0 g
• 無機鹽類（Salts）： 磷酸二氫鉀（KH₂PO₄）1.0 g、硫酸鎂（MgSO₄）0.5 g、氯化鈣（CaCl₂）0.1 g、氯化鈉（NaCl）0.1 g
• 維生素群（Vitamins）： 肌醇（Inositol）2.0 mg、泛酸鈣 0.4 mg、菸鹼酸 0.4 mg、鹽酸吡哆醇（B6）0.4 mg、鹽酸硫胺（B1）0.4 mg、對胺基苯甲酸（PABA）0.2 mg、核黃素（B2）0.2 mg、生物素（Biotin）0.002 mg、葉酸 0.002 mg
• 微量元素（Trace Elements）： 硼酸 0.5 mg、硫酸錳 0.4 mg、硫酸鋅 0.4 mg、氯化鐵 0.2 mg、鉬酸鈉 0.2 mg、碘化鉀 0.1 mg、硫酸銅 0.04 mg
• 最終 1X 溶液 pH 值（25°C）： 5.4 ± 0.2

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🧫 三、 微生物培養與分子遺傳學的核心應用情境
YNB w/o AA 主要是為基因轉殖酵母菌提供一塊「完全空白的篩選畫布」：

• 1. 基因缺陷型（Auxotrophic Strains）選擇性篩選：
  • 在研究**釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）**或畢赤酵母（Pichia pastoris）的基因選殖時，科學家常利用帶有特定營養缺陷標記（如 URA3, LEU2, HIS3, TRP1）的突變株作為宿主。
  • 將 YNB w/o AA 搭配營養缺陷胺基酸補充粉（如 SC Drop-out 或 CSM 混合粉末），即可人工調配出「缺乏單一、雙重或三重特定胺基酸」的選擇性培養基（如 SD-Ura, SD-Leu 平板）。只有成功導入外源質體並補足該胺基酸合成能力的陽性重組子，才能在其上發育出生長菌落。
• 2. 酵母人工染色體（YAC）的克隆與篩選：
  • 由於天然胺基酸的存在會干擾並阻止選擇性標記（Selectable Markers）的發揮，利用不含胺基酸的 YNB 能完美進行高階大片段 DNA 的選殖與維持穩定。
• 3. 碳源與氮源的同化代謝鑑定（Assimilation Tests）：
  • 在臨床真菌分類學中，可保持氮源固定，透過自由抽換外加的碳源（如葡萄糖、半乳糖、木糖、甘露醇等），用以精確鑑定、分類野生型真菌或酵母菌株的碳水化合物代謝特徵。

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🧪 四、 標準實驗室製備與滅菌操作規範（Directions）

1. 配製 10X 高濃度儲備液（Stock Solution — 推薦做法）：
   • 為了避免維生素與微量元素在高溫下遭到破壞，標準做法通常先配製 10 倍濃縮液：秤取 67.0 公克 的 YNB w/o AA 粉末，完全溶解於 1000 毫升的蒸餾水中（若自配固體平板，可同步加入所需的胺基酸缺陷補充粉 Drop-out 混合物與碳源）。
2. 除菌規範（絕對不可高壓滅菌）：
   • ⚠️ 警告： 含有 YNB 的溶液絕對不可放進滅菌釜進行高壓滅菌（Do not autoclave!）。高溫高壓會直接破壞配方內極度熱敏感的維生素 B 群與微量生長因子，導致培養基失效。
   • 正確操作： 必須使用 0.22 μm 微孔濾膜進行無菌過濾（Filter Sterilization）。
3. 無菌混合（1X 工作液配製）：
   • 在無菌操作台內，取 100 mL 的無菌 10X YNB 儲備液，加入 900 mL 的常規無菌蒸餾水中（若配製固體平板，則將 100 mL 的 10X 儲備液無菌倒入 900 mL 已高壓滅菌完成、且冷卻至約 50°C 的無菌洋菜水膠體中），充分混勻後即可倒板或使用。