Hygromycin B 產品名稱 ： Hygromycin B  產品編號 ： AT31282-04-9 產品規格 ： 1 g 廠　　牌 ： Chumeia 詳細資料 CAS:31282-04-9 分子式：C20H37N3O13    分子量：527.52 純度：>90% 化學性質：白色至類白色粉末，易溶於水和乙醇。 用途：生化研究 作用機制:潮黴素B是由吸水鏈黴菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素，通過抑制蛋白質合成而殺死細菌、真菌和高等真核細胞。潮黴素B通過幹擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成。目前常用於篩選和維持培養含潮黴素抗性基因的原核或真核細胞。  抗性基因： 對潮黴素B的抗性源自編碼潮黴素B磷酸轉移酶（Hph）的基因。至今發現兩種來源：  ► Streptomyces hygroscopicus產生的Hph抗性基因； ► Escherichia coli，Klebsiella pneumoniae內質粒攜帶的Hph抗性基因（常用）；   生物應用： 1）篩選和維持培養穩定轉染Hph+載體的原核細胞或真核細胞（植物細胞和哺乳動物細胞）；  2）由於作用模式的差異，常與G418 (GeneticinTM)，Zeocin™ 和blasticidin S聯合使用，篩選穩定轉染兩個不同   載體的細胞株； 3）抗病毒劑，由於潮黴素B選擇性滲透進入因病毒感染增強通透性的細胞，而且具有抑制翻譯的功效； 4）作為驅蟲藥加入動物飼料；  應用濃度： 潮黴素B用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化。推薦使用濃度為50-1000 μg/mL，適宜濃度需要殺滅曲線來確定。  哺乳動物細胞·200-500 μg/mL；細菌/植物細胞·100-300 μg/mL；真菌·300-1000 μg/mL；  產品使用： 使用一：殺滅曲線確定適宜殺死濃度（僅作參考，因個人檢測體系而異） （1）往組織培養級的96孔板內加入未轉染細胞，細胞密度約50-200細胞/孔；細胞貼壁之後，往每孔加入含不同濃度（如50-1000μg/mL，至少5個濃度）潮黴素B的200μL新鮮培養基； （2）37℃，5% CO2培養箱孵育細胞10-14天； （3）培養5-7天後更換新的培養液，培養液內含有相應濃度的潮黴素B； （4）10-14天後使用細胞增殖方法如MTT，CCK-8等評估細胞活力；也可以通過檢測細胞克隆數或百分比匯合率來確定毒性效應。一般選擇在10-14天能夠殺死所有細胞的最小濃度為適宜篩選濃度。 使用二：篩選穩定轉染細胞 （1）對於貼壁細胞，直接吸去60mm培養皿內的轉染細胞培養基，然後加入含有潮黴素B的新鮮培養基5-6ml；對於懸浮細胞，無菌條件250x g,離心10min除去舊的轉染細胞培養基，然後懸浮在約5ml的含潮黴素B的新鮮培養基； （2）5-7天後，如上方法更換含有潮黴素B的新鮮培養基； （3）再孵育細胞5-7天； （4）10-14天孵育後，培養體系中只含有能夠表達潮黴素B抗性表型的活細胞。因此篩選之後如步驟一，更換不含潮黴素B的新鮮培養基。 {備注}所提供的一切產品，為科研試劑或原料，不得用於注射、食用或其他用途，同時我們只對產品的質量負責，不對買方使用產品後引起的任何利潤與損失或間接損失或損害承擔責任！

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